公元前40年夏，安东尼回到意大利。此时，安东尼和屋大维之间的矛盾有所缓和，他娶了屋大维的姐姐奥克塔维娅为妻，以罗马传统的联姻方式巩固政治上的联盟。到公元前37年安东尼和屋大维的矛盾加深，安东尼回到东方，准备远征帕提亚。他以征途艰辛，不宜安置于军营为理由，把奥克塔维娅遣送回罗马。而当安东尼到达安条克，即邀请克利奥帕特拉七世会面，并且，违反罗马的传统习惯同克利奥帕特拉七世结婚。
安东尼和克利奥帕特拉七世的结合，并非全由情欲所驱使，而是具有政治目的。安东尼企图稳定罗马的东方行省，准备远征帕提亚，以及同屋大维进行斗争，亟需得到埃及在财政上的支援。而克利奥帕特拉七世在埃及托勒密王国发生深刻的社会危机之时，施展种种手腕，包括运用迷惑安东尼的方式，以图在罗马的强权之下，维护和发展托勒密王国，加强和扩大自己的统治权力。为了满足克利奥帕特拉七世的野心，安东尼把叙利亚中部地区、腓尼基沿岸一些城市、塞浦路斯岛，以及纳巴特王国部分地区等，赠给克利奥帕特拉七世。克利奥帕特拉七世支持安东尼远征帕提亚，结果未能获胜。公元前34年，安东尼出征亚美尼亚得胜后，不是在罗马而是在埃及的亚历山大里亚，按照埃及的礼仪来举行凯旋式，两人同登黄金做成的王座，克利奥帕特拉称为“诸王之女王”，其子托勒密十五世称为“诸王之王”。安东尼在东方的所作所为，特别是他与克利奥帕特拉七世的关系，始而受到罗马人的非议，继而激起了他们的恼怒。他们斥责安东尼将罗马的征服地赠与克利奥帕特拉七世及其子女，准备迁都亚历山大里亚另建新王朝。在罗马，人们对克利奥帕特拉七世恨之入骨，认为她是除了汉尼拔以外构成对罗马最大威胁的女王。这就使安东尼威信扫地，丧失了国内的有力支持。这一点被屋大维利用，也是造成安东尼在与屋大维斗争中失败的原因之一。
公元前32年安东尼和屋大维的矛盾趋于尖锐．完全决裂了。安东尼应克利奥帕特拉七世之求，正式修书遗弃其妻奥克塔维娅。屋大维也发誓为其姐所受的侮辱报仇。他不顾冒犯罗马的传统习俗从维斯塔贞女手中取得安东尼放置于神庙中的遗嘱，公布于众。安东尼的遗嘱记述了他对克利奥帕特拉七世及其子女的领土分配，还指令克利奥帕特拉七世将其遗体安葬在亚历山大里亚。遗嘱一公布，舆论哗然，群情激愤。据此，元老院和公民大会[特里布斯大会]以侵占罗马人民财产为由，对克利奥帕特拉七世宣战，并剥夺了安东尼的执政官职务以及其他一切权力。
